人妻连裤丝袜中文字幕_中文字幕人妻在线_91人妻人人澡人人爽人人麻豆_亚洲精品一区二区三区影

歡迎進入蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司!
技術(shù)文章
首頁 > 技術(shù)文章 > 蛋白免疫印跡實驗常見問題原因分析匯總

蛋白免疫印跡實驗常見問題原因分析匯總

 更新時間:2022-03-09 點擊量:2311

蛋白免疫印跡實驗常見問題原因分析匯總?cè)缦拢?/strong>

一、檢測無信號

主要可能由于以下原因?qū)е拢?/strong>

1. 用于檢測的二抗不匹配解決辦法:需要確定一抗的宿主

2. 一抗二抗的濃度過低:需要耐心地重新實驗。

3.一抗不識別被檢測物種中的蛋白質(zhì):可以再檢查以下一抗的特異性。

4.凝膠上上樣的蛋白量太少:凝膠上樣品過少也會導(dǎo)致信號弱,所以適當(dāng)增加樣本量也可以防止此現(xiàn)象發(fā)生。

5.傳輸效率相當(dāng)?shù)?/span>:出現(xiàn)這種情況可以嘗試修改轉(zhuǎn)移程序的操作確保 PVDF 與甲醇預(yù)孵育。轉(zhuǎn)移后干燥 PVDF 以確保蛋白質(zhì)與疏水膜的結(jié)合

6.一抗使用次數(shù)過多:億康如果過度稀釋對信號檢測也會有一定的影響,所以盡量使用新稀釋的一抗。

7.阻塞時間過長或洗滌次數(shù)過多:盡量減少阻塞時間和洗滌時間。

8. 檢測試劑盒不起作用:這種情況出現(xiàn)的較少,實驗中注意試劑盒的有效期是否正常,也可使用陽性對照并確保檢測試劑盒正常工作

9.NaN可能會抑制二抗:盡量避免在稀釋緩沖液中使用NaN。

10.一抗或二抗的孵育時間太短:可適當(dāng)延長孵化時間

11. SDS 上樣緩沖液和樣品裂解液沒有充分混合或者混合不均勻: SDS 上樣緩沖液需要隨用隨配,以保證其新鮮度,另外緩沖液與裂解液可以使用渦旋混合器進行充分混合。

二、無蛋白質(zhì)的區(qū)域具有高背景

蛋白免疫印跡常見問題中出現(xiàn)這種現(xiàn)象,可能由于以下幾種情況所導(dǎo)致。

1.可能由于封閉時間過短或封閉緩沖液使用不當(dāng)。大多數(shù)一抗基本不會和白蛋白或酪蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。如果任何沒有蛋白質(zhì)的區(qū)域具有高背景,則封閉步驟可能無法正常工作。

2.一抗二抗的濃度過高所致:適當(dāng)降低抗體濃度。

3.洗滌不夠充分:可以增加洗滌次數(shù)

4.孵化溫度:一抗的孵育溫度以4°C左右為宜。

5.轉(zhuǎn)印膜選用不當(dāng),或者轉(zhuǎn)印膜干燥:一般情況下選用PVDF膜具有較好的轉(zhuǎn)印效果,同時防止膜干燥

6.較高分子量的高背景也有可能是由于還原試劑、SDS或樣品加熱方式時長不正確。


免疫印跡

三、出現(xiàn)白帶或信號迅速減弱

1.一抗或二抗過高:適當(dāng)降低抗體濃度

2.ECL 溶液被污染:注意保持ECL 溶液新鮮程度,或者使用新配制 ECL 溶液

3.混合后的 ECL 溶液壽命縮短:注意選擇合適的ECL 解決方案。

四、斷帶、特殊條帶出現(xiàn)

凝膠電泳期間使用的電壓過高或緩沖液溫度過高會出現(xiàn)這種情況。

五、出現(xiàn)漫反射帶

1.抗體濃度過高:適當(dāng)降低抗體濃度

2.凝膠上上樣的蛋白質(zhì)量太高:盡量減少上樣量。

六、出現(xiàn)空白區(qū)域

這種情況多數(shù)是由于轉(zhuǎn)移不均勻所造成。轉(zhuǎn)移時需要確保膜在凝膠上均勻無氣泡

七、非特異性信號

有的時候高濃度的抗體也導(dǎo)致非特異性信號出現(xiàn)。內(nèi)源性免疫球蛋白,尤其是在組織裂解物中 容易出現(xiàn)信號干擾??梢酝ㄟ^預(yù)先清除內(nèi)源性免疫球蛋白減少來自內(nèi)源性免疫球蛋白的非特異性信號。

八、條帶模糊或者出現(xiàn)污斑

這多數(shù)由于凝膠平衡時間不足或凝膠與膜接觸不均勻所致。

郵箱

shaohua_geng@bioalpha.cn

地址

江蘇蘇州工業(yè)園區(qū)星湖街218號生物納米園A5樓301室

掃一掃,關(guān)注我們
在线观看免费观看在线| 丁香花高清在线观看完整佛山| 日日摸av| 三年片在线观看免费版| 欧美色就色| 成人mm视频在线观看| 一区二区三区久久久| 精品一区二区在线观看| 亚洲av人人夜夜澡人人爽| 亚洲jizzjizz| 宝宝~腿往上抬我受不了了视频| 欧美性受黑人性爽| 日韩一区二区精品| 草草影院ccyycom屁屁影院| mm1313亚洲国产精品美女| 欧美一区二区性| jizz欧美性15| free牲欧美人与doog| 精品乱子伦一区二区三区费 | 人妻少妇精品无码专区学生| 成人国产精品入口| 国产亚洲精品美女久久久久| 欧美xxxwww| 懂色视频一区二区观看| 人人干天天日| 天天操天天干天天日天天射| 人妻熟女一区二区三区APP下载| 91精品国产91久久久久久吃药 | 超碰人人人妻| 午夜欧美一区二区三区免费观看| 91精品国产91久久久| yy111111影院理伦片在线| 色婷婷综合中文久久一本| 三年中文在线观看免费高清第4版 色噜噜狠狠一区二区三区果冻 | 天堂在线中文在线| 蜜臀av免费一区二区三区| 日韩精品一区二区三区观看视频| 色狠狠一区二区三区熟女91| 河南少妇搡bbbb搡bbbb| .亚洲av毛片一区二二区三三区| 日本一区二区高清不卡|